人骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的量效关系探究.pdf

　　中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院

　　中文摘要

　　目的：

　　bone stem

　　骨髓间充质干细胞(humanmesenchyIIlalcells，BMSCs)是组

　　织工程骨目前最常用的种子细胞，BMSCs构建组织工程骨(tissueengineering

　　bone，T朗)的量效关系是TEB临床应用中的重要问题，但是目前尚未见明确报道。

　　本实验研究了hBMSCs体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达和体外传代

　　对h酬SCs干细胞表面标志表达、增殖和分化能力的影响，并通过不同浓度hBMSCs

　　构建TEB的量效关系进行了初步探讨。

　　方法：

　　l、密度梯度离心法分离hBMSCs，应用流式细胞检测、成骨及成脂诱导分化进行

　　干细胞鉴定。

　　2、对h酬SCs进行体外成骨诱导分化，应用RT—PCR法对体外成骨诱导不同时间

　　点的成骨相关基因表达进行检测。

　　3、对hBMSCs进行体外传代扩增培养，应用流式细胞技术、MTT法和细胞计数法

　　PcR法和

　　检测不同代数hBMSCs的于细胞表面标志和增殖能力；应用Rea卜time

　　油红O染色检测不同代数hBMsCs的成骨和成脂分化能力。

　　(HE)和Rea卜timePCR法检测不同浓度hBMSCs在B—TCP支架上的生长和成骨

　　分化情况。

　　5、使用相同浓度不同体积hBMSCs接种B—TCP支架构建组TEB并植入裸鼠皮下，

　　应用组织学检测其体内异位成骨情况。

　　结果：

　　l、h酬SCs的生物学特性：密度梯度离心、贴壁筛选结合消化控制法分离得到的

　　外可分化为成骨细胞和脂肪细胞。

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　　2、hBMSCs体外成骨诱导：成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达，

　　基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。

　　3、h跚SCs体外传代培养：P4代以后的hBMSCs的增殖能力、成脂和成脂分化

　　能力减弱。

　　在B

　　不同浓度组的成骨分化水平无明显差异。

　　TEB，接种体积增加，体内成骨成功率增加。

　　结论l

　　密度梯度离心、贴壁筛选结合消化控制法可成功分离h酬SCs。hBMSCs体外

　　成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本

　　相似；Passage5(P5)代之前的hBMSCs增殖和分化能力较强，适宜临床选用；

　　骨成功率随hBMSCs的接种数量增加而增加。hBMSCs构建组织工程骨的量效参数

　　能够为组织工程骨的进一步研究及临床应用提供参考。

　　关键词骨髓间充质干细胞成骨诱导组织工程构建

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　　Abstract

　　objectives：

　　m曲肌bone

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