菌种冻干管制作流程

　　   

　　 

　　试剂与器材： 

　　1 、菌种   

　　2 、培养基，液体或固体   

　　3 、试剂，脱脂奶粉   

　　4 、仪器：冻干管、巴 斯德吸管、 5ml 大枪头、 1ml 枪头、试管、灭菌锅、冷冻干燥机、 -80 ℃冰箱、三角瓶、空平 板   

　　 

　　 

　　制作步骤：   

　　1 、 准备工作       

　　剪标签， 标签标明菌的属名、 种名和制作日期， 如 Agrobacterium radiobacter  DSM  30147      2013.05 做成小纸条，小纸条要窄，因为冻干管很细，宽了进不去。每株菌做 10 管， 装入标签以后再管口塞上脱脂棉，用报纸包好， 5ml 大枪头、 1ml 枪头和巴斯德吸管塞上棉 花， 5ml 大枪头和巴斯德吸管用报纸包好，所有的东西 121 ℃， 30min 灭菌。

　　制作当天再配 牛奶，奶粉是特定的牌子，配制浓度为 10% ， 121 ℃， 20min 灭菌。   

　　 

　　2 、 培养菌种

　　       将要保藏的菌接入 3ml 液体培养基中， （要保证菌是对的） ， 待菌长浓以后准 备做冻干管。  

　　 

　　 3 、在超净台里，每 3ml 菌液约加 4ml 脱脂牛奶，混匀，将冻干管头上的棉花取下，放入灭 菌的平板内， 用巴斯德吸管吸约 1ml 加入冻干管底部的玻璃圆球内， 不能太满， 约 3/4 即可。 

　　  

　　4 、将取出的棉花塞回管口，放 -80 ℃冰箱预冷，最短 5h ，再放入冷冻干燥机，抽真空冷冻 干燥，约 24h ，直到干燥为止。  

　　 

　　5 、将冷冻干燥好的管子插入抽真空的管子上，一边抽真空一边用高温的火焰熔封。完毕以 后用电火花真空检测仪检测冻干管里是否为真空， 若为真空， 则当检测器打到管子上时， 整 个管子显紫色。  

　　

　　 

　　 6 、检测

　　     随机挑取一管，在酒精灯上灼烧，在热处滴几滴无菌水，使之破裂，再用镊子敲 开，打开冻干管以后，加入约 200ml 无菌水，用接种环搅匀，再在相应的固体平板上画线， 同时接一个液体 PA 瓶，在适宜条件下培养，菌体长出来以后，检测。   

　　 

　　7 、做好的冻干管放 4 ℃或室温保存。   

　　 

　　注意事项： 样品干燥的程度对菌种保存的影响很大， 一般要求样品的含水率为 1%-3% ， 判断 方法，外观，样品表面出现裂痕，与冻干管内壁有脱落现象，对照管完全干燥。