国产重组人生长激素注射液在健康受试者中的生物等效性

　　国产重组人生长激素注射液在健康受试者中的生物等效性

　　来源

　　《中国新药杂志》 2022 年第31 卷第7 期

　　作者

　　刘悠然，王变珍，董立厚，陈东林，陆春燕，金继婷，王莉，孙祥宇，宋海峰，郑莉

　　四川大学华西药学院

　　北京蛋白质组研究中心，蛋白质组学国家重点实验室

　　安徽安科生物工程( 集团) 股份有限公司

　　四川大学华西医院

　　摘要

　　目的: 评价单一给药后受试制剂( 重组人生长激素注射液) 和参比制剂( 注射用重组人生长激素) 的生物等效性及安全性?

　　方法: 研究采用单中心?双周期?随机?盲法?自身交叉对照设计?将48 例受试者平均分为2 组,每组受试者分别在2 个周期交叉皮下注射重组人生长激素( r-hGH) 受试制剂或参比制剂0.067 mg·kg - 1 ( 0.2 IU·kg - 1 ) ,每次给药之间有3 d 的洗脱期?通过比较受试制剂和参比制剂的主要药动学( PK) 参数的几何平均值比率90%置信区间( 90% CI) 来判断生物等效性?

　　结果: 健康受试者皮下注射重组人生长激素受试制剂和参比制剂峰浓度( Cmax ) 和曲线下面积( AUC0 - t和AUC0 - ∞ ) 的90% CI 均在80% ~125%的可接受范围内?表明受试制剂与参比制剂之间具有生物等效性?受试制剂和参比制剂的不良事件和不良反应的类型和发生率相似?

　　结论: 该受试制剂是已上市的重组人生长激素冻干注射剂的良好替代品,将为患者提供更多的治疗选择?

　　关键词

　　重组人生长激素; 生物等效性; 药动学

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　　正文

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　　人生长激素具有调节代谢?刺激蛋白质合成和加速脂肪代谢等生理功能,能促进骨骼和肌肉组织的生长发育[1]?常用于治疗儿童内源性生长激素缺乏或不足而导致的生长缓慢[2 - 3]; 可促进损伤?严重烧伤患者的伤口愈合从而减少住院时间[4]?

　　重组人生长激素( recombinant human growth hormone, r-hGH) 在临床上已经取得广泛的应用,但供临床选用的剂型还是以冻干粉针为主?由于生长激素注射液减少了冻干粉针剂需要冻干?加水复溶等环节,且具有良好的稳定性,重组人生长激素水针剂替换粉针剂成为一种国际发展趋势?安徽安科生物工程( 集团) 股份有限公司自研产品注射用重组人生长激素( 冻干粉针) 于1999 年上市,发展至今已有2,4,4. 5,6,10 和16 IU 共计6 个规格?本研究的受试制剂是在上市剂型( 冻干粉针) 的基础上研制出的重组人生长激素注射液,规格为10 IU·3. 33mg - 1·mL - 1?临床前药学?药理毒理研究表明: 该重组人生长激素注射液配方合理?制剂工艺稳定?产品质量可控,具备良好的稳定性和安全性?

　　本品于2013 年7 月获得原国家食品药品监督管理总局批准进行人体生物等效性研究?本制剂的上市可以丰富中国国内r-hGh 水针剂剂型,更利于为患者制定灵活的用药方案?

　　本研究严格遵照当时《药物临床试验质量管理规范》( GCP) 及本研究所现行的标准操作规程实施?本研究遵照原国家食品药品监督管理总局《化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则》和生物样品分析国际规范等的有关要求?本研究方案经医学伦理委员会审核批准[批件号: 2016 年临床试验( 西药) 审( 35) 号]?

　　对象与方法

　　1 受试者选择

　　1.  1 纳入标准

　　18 ~ 45 周岁健康成年志愿者,男女兼有,同批次受试者年龄相差不超过10 岁?试验前14 d 内按要求体检合格,体重指数( BMI) 在19 ~24 kg·m - 2范围内,体重在45 ~ 75 kg?受试者同意并采取可靠避孕措施,确保研究开始到结束后6 个月内没有生育计划?自愿参加临床试验,并签署知情同意书?

　　1.   2 排除标准

　　① 经询问受试者有明显的药物或食物过敏史?② 经询问受试者2 周内接受非处方药物和/或处方药物?维生素和/或中药治疗?③ 经询问受试者存在长期服用某种药物或有药物依赖史?药物滥用史者,嗜烟( 平均10 支·d - 1以上) 或者酗酒( 酒精30 mL·d - 1以上) 史; 有吸毒史者?④ 受试者乙肝表面抗原( HBsAg) ?丙肝?HIV 和梅毒检测任意1 项阳性?⑤ 经询问受试者有以下病史: 糖尿病或者在筛查时发现空腹血糖升高,任何临床显著的心脏?呼吸( 轻度哮喘除外) ?肾脏?肝脏?胃肠道?内分泌?血液或者精神疾病或者障碍,或者任何未得到控制的医学疾病; 伴有经常性便血的痔疮或肛门疾病?⑥ 经询问受试者在接受研究药物前的3 个月内接受任何研究性药物治疗; 或接受研究药物前3 个月内用过已知对某脏器有损害的药物?⑦ 经询问受试者研究前3 个月中发生重大疾病或严重症状?⑧ 经询问或者检查发现受试者患有自身免疫性疾病病史,如牛皮癣?类风湿关节炎?炎性肠病等;恶性肿瘤疾病史; 精神疾病史者?⑨ 经询问有活动性感染需治疗者?⑩ 经询问受试者在接受研究药物前3 个月内献血或接受输血?? 妊娠或哺乳期女性; 或育龄妇女血或尿妊娠试验呈阳性; 近期有生育计划,研究开始到结束后6 个月拒绝采取有效的物理避孕措施受试者( 包括但不限于避孕套?宫内节育环等) ?? 研究者出于任何原因认为受试者不适合参加本试验??参加本研究的研究者或研究助理?药剂师和其他工作人员?

　　1.  3 剔除标准

　　① 不符合入选标准者?② 符合排除标准者?③ 一次研究药物都未使用者?④ 使用其他影响研究药物安全性判定和/或药物代谢过程的药物或食物?⑤ 同时使用了其他治疗以致影响评价者?⑥ 无任何记录者?

　　1.  4 脱落标准

　　① 试验过程中,受试者不能按照方案要求参与试验,依从性较差?② 使用其他影响研究药物安全性判定和/或药物代谢过程的药物或食物?③ 受试者撤回知情同意书?④ 受试者出现严重不良事件无法继续试验?⑤ 研究者判断其他不合适继续试验的?

　　本研究共筛选59 例受试者,49 例成功入选,其中男性33 例,女16 例,平均年龄( 23. 3 ± 2. 3) 岁,平均身高( 167. 6 ± 7. 7) cm,平均体重( 61. 1 ± 8. 9) kg,体重指数( BMI) 为( 21. 6 ± 1. 6) kg·m - 2?1 例受试者没有服用药物就退出了研究?其余48 例受试者按计划使用参比制剂( R 药) -受试制剂( T 药) 或T-R 序列,并完成研究?

　　2 试验药品

　　T 药: 安徽安科生物工程( 集团) 股份有限公司研发提供的重组人生长激素注射液( 液体制剂,每支10 IU·3. 33 mg - 1 ) ,批号: 20160408?

　　R 药: 安徽安科生物工程( 集团) 股份有限公司研发供的重组人生长激素注射剂( 冻干粉配方,每支10 IU·3. 33 mg - 1 ) ,商品名:安苏萌,批号: 20160226?试验期间维持用药: 思他宁,注射用生长抑素,3 mg·支- 1,生产单位: Merck Serono SA Aubonne Branch 公司,批号: AU014959?

　　3 试验方案

　　本研究采用单中心?双周期?随机?盲法?自身交叉对照设计?每组受试者分别经皮下注射受试制剂或参比制剂0. 067 mg·kg - 1 ( 0. 2 IU·kg - 1 ) ,洗脱期为3 d?为了排除自身分泌的生长激素的干扰,在每个注射周期中,受试者在受试制剂或参比制剂注射前2 h 输注生长抑素,输液速率为100 ~ 120 μg·h - 1,持续到受试制剂或参比制剂给药后24 h,相当于26 h内输完3 mg 生长抑素?采血点为当天给药前2 h和给药前( 0 h) ,给药后0. 5,1,1. 5,2,3,4,5,6,7,8,10,12,16 和24 h,共16 个采血点?r-hGH 抗体血液样本采样点为第1 次给药0 h 和第2 次给药24 h?

　　4 生物等效判定标准

　　根据美国FDA 和国家药品监督管理局( NMPA)的指南规定,2 种药物生物等效性的评估通常由药动学( PK) 指标决定?峰浓度( Cmax ) 和药物曲线下面积( AUC0 - t 和AUC0 - ∞ ) 的几何平均值比率的90%置信区间( 90%CI) 均需在80% ~ 125%之间?

　　5 安全性评价

　　通过记录?报告和分析基线状况?不良事件?体格检查?生命体征,实验室检查和其他评估试验药物的安全性?

　　6 统计分析

　　药动学分析由WinNolin 6. 4,其他采用SAS 9. 3软件完成?

　　根据测得的各受试者血药浓度-时间数据,绘制血药浓度-时间曲线?用非房室模型分析药动学参数分析集数据,计算各受试者的药动学参数,包括:Cmax, AUC0 - t, AUC0 - ∞,Tmax,Vd, t1 /2,CL, Ke 等?同时计算各参数的算术?几何均数和标准差?采用线性模型进行受试制剂/参比制剂变异模型的分析?计算两药主要药动学参数( Cmax, AUC0 - t ) 的几何平均值比率的90%置信区间,并进行等效性比较,等效区间设定为80% ~ 125%?其他参数t1 /2, AUC( 0 -∞) ,Vd, Ke, CL 计算几何平均值比率的90%置信区间,Tmax采用配对秩和检验进行统计学检验?

　　7 检测方法及论证

　　健康受试者血清样品中r-hGH 浓度采用经方法学确证的酶联免疫吸附分析法( ELISA) 进行定量检测?所有分析批的标准曲线和质控样品均用受试制剂重组人生长激素注射液配制,最低定量限( LLOQ) 为2. 50 ng·mL - 1?

　　分析方法验证的拟合模型为Logistic, 4-Parameter;定量方式为仪器响应值的平均值; 分析仪器/程序为SpectraMax 340PC384,Softmax pro ver. 6. 4 Gxp; 拟合软件为Watson LIMSTM V. 7. 3. 0. 01?

　　验证结果表明,标曲的定量范围为2. 50 ~ 100. 00ng·mL - 1范围内; 准确度和精密度验证结果表明该方法的精密度和准确度在可接受范围之内; 在75 ~3 333 000 ng·mL - 1浓度范围内无“hook”效应; 样品可以用5 ~ 10 倍的稀释倍数进行稀释; 选择性实验结果表明,80%以上个体基质验证样品均满足选择性验证的可接受标准; 稳定性结果表明,样品在2 ℃ ~8 ℃放置4 h 和在室温( 18 ℃ ~ 28 ℃) 放置4 h 是稳定的,且样品冻融4 次对样品的稳定性不存在影响;现有长期稳定结果表明,样品在- 10 ℃ ~ - 30 ℃和- 60 ℃ ~ - 90 ℃保存5 周是稳定的?参比制剂溶液冻存稳定性表明参比制剂分装?冻存溶液在- 60 ℃ ~ - 90 ℃冻存6 周以内是稳定的,可用于配制标准曲线和验证样品?

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　　结果

　　1 血药浓度-时间曲线

　　健康受试者皮下注射重组人生长激素受试制剂和参比制剂后的血药浓度-时间曲线见图1?

　　

　　2 药动学参数

　　健康受试者皮下注射重组人生长激素受试制剂和参比制剂后的药动学数据详见表1?

　　

　　3 生物等效性

　　健康受试者皮下注射重组人生长激素受试制剂和参比制剂后的药动学参数的几何均数的比值完全落在80.00% ~ 125.00%之间,表明注射重组人生长激素受试制剂与参比制剂具有生物等效性,见表2?

　　

　　4 安全性

　　根据不良事件( AE) 的发生时间和实际用药情况,判断AE 的发生阶段( 用药前?使用T 药后?使用R 药后) ?将使用T 药后发生的AE 汇总到“T 药”周期,将使用R 药后发生的AE 汇总到“R 药”周期?AE 是指接受研究用产品的受试者出现的任何不良的医学事件,该事件并不一定与治疗有因果关系,因此AE 可以是任何不利和非预期的体征( 包括异常实验室结果) ?症状或与使用试验药物有时间相关性的疾病,无论是否与该药品有因果关系?试验进行期间,用药前共有3 例受试者发生3 例次AE?T药周期共有43 例受试者发生122 例次AE,AE 发生率为89. 6%( 43 /48) ,转归情况为痊愈122 例次,其中第1 周期有22 例受试者发生62 例次AE,第2 周期有21 例受试者发生60 例次AE; T 药周期共有34例受试者发生58 例次不良反应,不良反应发生率为70. 8%( 34 /48) ,其中第1 周期有18 例受试者发生26 例次不良反应,第2 周期有16 例受试者发生32例次不良反应?R 药周期共有47 例受试者发生121 例次AE,AE 发生率为97. 9% ( 47 /48) ,转归情况为痊愈119 例次,2 例次消失,其中第1 周期有24例受试者发生62 例次AE,第2 周期有23 例受试者发生59 例次AE; R 药周期共有38 例受试者发生51例次不良反应,不良反应发生率为79. 2% ( 38 /48) ,其中第1 周期有23 例受试者发生26 例次不良反应,其中第2 周期有15 例受试者发生25 例次不良反应?受试制剂和参比制剂AE 和不良反应的类型和发生率相似?试验过程中的AE 严重程度均为轻?中度; 无严重AE; 无导致退出的AE?

　　讨论

　　根据Brimhall 等［5］报道的数据，生长激素的半衰期约为2 ～ 4 h，r-hGH 在30 h 后基本从体内排出，因此本研究的洗脱期设定为72 h。研究结果表明，给药24 h 后血药浓度降至基线。重组人生长激素的药效学研究表明，药物进入人体后，主要通过胰岛素样生长因子( IGF-1) 和重组人胰岛素生长因子结合蛋白-3( IGFBP-3) ［6］发挥作用，IGF-1 和IGFBP-3的生产和消除落后于生长激素［7］。因此如果基于药效学，本研究的洗脱期则需要延长［8］。但试验结果表明受试制剂生物等效性和安全性均与参比制剂一致，因此忽略重组人生长激素的药效学并不会影响生物等效性的研究结果，这一结论能否推广到其他药物上仍需进一步探索。

　　综上所述，安徽安科生物工程( 集团) 股份有限公司自研产品重组人生长激素注射液与上市的参比制剂具有生物等效性。

　　

　　参考文献

　　详见《中国新药杂志》 2022 年第31 卷第7 期

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