健康成人诱导痰细胞计数正常值参考范围研究及其意义.pdf

　　中 文 摘 要

　　健康成人诱导痰细胞计数正常值

　　参考范围的研究及意义

　　摘 要

　　目的:诱导痰是一种相对无创的气道炎症检测方法，主

　　要是通过高渗盐水雾化吸入促使咳痰，通过分析咯出痰液的

　　成份，了解气道的生理或病理状况。它主要用于检测气道是

　　否存在炎症及炎症的性质，也用于肺部肿瘤的研究，临床上

　　可用于疾病的鉴别诊断及临床用药指导。诱导痰具有精确、

　　无创和重复性好的特点，适于连续观察。但其结果的解释有

　　赖于正常成人诱导痰细胞计数的正常参考值的确定。本文的

　　主要 目的就是确定正常成人诱导痰细胞总数及分类的正常

　　参考值及其分布规律，同时探讨吸烟对诱导痰细胞的影响

　　方法:随机抽取 120例健康成人志愿者，男70例，女

　　50例，两组年龄均衡，平均年龄 36+13岁 (X 士SD).吸

　　烟组62例，其中男35例，平均年龄35士12岁，女27例，

　　平均年龄36+14岁。非吸烟组58人，其中男30例，平均年

　　龄38士13岁，女28例，平均年龄33+13岁，两组年龄、性

　　别均衡。所有研究对象符合以下条件:①、无过敏及变态反

　　应性疾病。②、无支气管哮喘、COPD或其它慢性呼吸系统

　　病史，无鼻、咽、喉及胸部慢性病史。③,3个月内无呼吸

　　系统急性感染病史或相应症状。④、FEV1%预期值>80%.

　　⑤、胸部X线检查无异常。非吸烟组要求没有吸烟史或戒烟

　　20年以上，不包括被动吸烟者。吸烟组为现行吸烟且吸烟指

　　数 (每日吸烟支数x吸烟年数)>100年支。诱导痰前24小时

　　中文 摘 要

　　不能吸烟或被动吸烟。

　　所有符合条件的受试者首先接受肺功能检查，测FEV1%

　　预期值作为基线数据。吸入沙丁胺醇气雾剂20012g。用射流

　　式雾化吸入器雾化吸入4.5%高渗盐水。高渗盐水雾化吸入持

　　续时间依次递增 ((2,4,8,16分钟)。每次雾化吸入完毕后

　　1分钟测FEV1%预期值，然后清洁口腔、鼻腔，鼓励其尽力

　　咯痰，痰吐于预先准备好的洁净烧杯中。如果诱导痰过程中

　　出现下情况中止雾化吸入，中止雾化指征:①、出现呼吸困

　　难、喘憋或剧烈咳嗽等不适症状，无法继续雾化吸入者。②、

　　FEV1%预期值较基础值下降大于等于20%者。③、受试者不

　　能合作或受试者要求中止雾化吸入者。诱导痰中止时基本完

　　成所有阶段诱导痰程序，或取得满意的痰液标本，则为有效。

　　否则视为诱导痰失败。如果有上述情况中①或②的情况，立

　　即中止高渗盐水雾化吸入，并给予沙丁胺醇气雾剂200ug,

　　必要时静脉滴注氨茶碱或采取其它对症处理。直至受试者安

　　全恢复。要求诱导痰标本中无脓性、血性、寄生虫或其它污

　　染成份，否则视为不合格标本，予以剔除。所有诱导痰标本

　　置于40C冰箱保存待检。

　　痰液处理:诱导痰标本在2小时内处理，首先从混有唾

　　液的诱导痰标本中挑出痰块，尽量减少唾液污染。然后称重，

　　在称重后痰液标本中加入4倍体积0.1%的二硫苏糖醇(DTT)

　　溶液 (即:1克痰加4毫升DTT溶液)。将加入0.1%二硫苏

　　糖醇的诱导痰标本溶液置于370C水浴中震荡20分钟，充分

　　混匀。然后用48itm尼龙滤网过滤。过滤后的细胞混悬液以

　　2000转/分的速度离心5分钟。在离心沉渣中加入PBS缓冲

　　液，使细胞混悬液的体积等于离心前体积。台盼兰染色测定

　　中文 摘 要

　　细胞活力，并计数细胞总数。剩余的细胞混悬液中加入PBS

　　缓冲液，调整细胞浓度至约x10“左右。置于细胞离心机中，

　　以450转/分的转速离心10分钟，取出载玻片，自然风干，

　　然后装入自动染色机中，进行苏木素一伊红染色。最后封片，

　　在油镜下进行细胞分类计数，至少计数500非鳞状上皮细胞。

　　结果:115人成功的完成了诱导痰，成功率95.8%。诱

　　导痰标本呈粘液状，灰白色，平均重((X1SD)276mg189mga

　　平均细胞活力为 72%士18%。由于在处理痰液时已选出痰液

　　块，去除了唾液污染，平均鳞状上皮细胞为4%士7%.

　　结果显示正常人诱导痰中以巨噬细胞和中性粒细胞为

　　主，有少量的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞。

　　部分人诱导痰中嗜酸性粒细胞缺如。正常成人诱导痰细胞总

　　数为非吸烟组3.1012.15x106/g