原创新生实验鼠如何安乐死才能符合伦理学要求？

　　原标题：新生实验鼠如何安乐死才能符合伦理学要求？

　　医学科研人员在动物实验中需遵循国际实验动物护理和使用指南的建议，即Weatherall (2006)报告和NC3Rs指南。文章中需提供批准动物实验的动物伦理委员会机构名称和其批准号及审批日期（具体至年月日）。如果不需要伦理委员会的批准，稿件中应明确说明这一点及原因。提供该研究可免于审批要求的任何相关规定。为减轻动物痛苦而采取的相关措施细节。建议在进行动物体内研究时应遵循ARRIVE报告指南(https://arriveguidelines.org/arrive-guidelines/experimental-animals)。实验程序应保证实验动物不受不必要的痛苦。文章还应描述实验过程和所用麻醉剂的实验细节。安乐死方法应符合美国兽医协会的《安乐死指南2020版》的要求。

　　报道使用被美国兽医协会（AVMA）的《安乐死指南2020版》列为不可接受的安乐死方法（https://www.avma.org/KB/Policies/Pages/Euthanasia-Guidelines.aspx）或使用被广泛禁止的麻醉方法（如水合氯醛、氰化物、氯仿(e.g., chloral hydrate, Cyanide, chloroform)）的稿件，在首次提交时必须包括在特定研究设计中使用的科学理由，以及其动物研究伦理委员会对特定使用的批准确认。这些稿件在发表前可能会受到额外的伦理学考虑。

　　最常用且被广泛接受的安乐死方法：

　　动物实验最广泛使用，且最为接受的动物安乐死方法是戊巴比妥钠注射。注射戊巴比妥钠可以使啮齿类动物迅速失去知觉，通常安乐死的剂量是麻醉剂量的3倍。

　　给药方式：对于啮齿类动物，可以选择静脉注射（IV）或腹腔注射（IP）的方式给药。采用这2种方式注射戊巴比妥钠，会导致动物出现疼痛，因此在《安乐死指南2020版》中指出，使用戊巴比妥钠进行安乐死，需联合使用局部麻醉药和抗惊厥药，以帮助动物缓解疼痛。

　　胎鼠和新生鼠的安乐死方法：

　　AVMA指出，实验鼠由于受体内一系列激素的影响，胎鼠在子宫内是无意识的，缺氧不会引起任何反应，因此对母鼠进行安乐死后，没有必要单独对胎儿进行安乐死。新生鼠出生时神经系统发育不成熟，感觉神经在出生后5-7天才发育完成。因此，胎儿和新生小鼠可采用如下安乐死方法：

　　1. 药物注射法：戊巴比妥钠与局麻药，抗惊厥药联合注射可用于胎儿和新生儿安乐死

　　2. 吸入法：吸入CO2对胎儿及新生小鼠是有效的，新生动物由于适应了在母体子宫里的缺氧状态，对缺氧有较强的忍耐力，因此作用时间较长,就像上文中提到的，新生小鼠可能需要50min，新生大鼠需要大约35min。在新生儿对疼痛刺激无反应时，可采用辅助方法，如：颈椎脱位或斩首。当使用如乙醚、异氟烷等卤代麻醉剂时，必须采用辅助方法(如颈椎脱位、斩首)以避免恢复的可能性。

　　3. 低温法：出生10天内的新生大小鼠可以采用逐渐降温的方式进行安乐死。需要注意：不可直接将动物直接接触冰或预冷的表面，因为冷的表面会导致组织损伤，引起动物疼痛，另外超过10天的啮齿动物不建议使用低温法。对于无意识的出生5天以内的新生大小鼠可以通过液氮快速冷冻法进行安乐死，超过10天的大小鼠可按照成年动物的安乐死方法进行操作。（这里需要特别强调的是有一些研究者应用直接将新生鼠置于冰面，然后进行取材的方法是不可取的）

　　注意：不管采用何种方式进行安乐死，最终步骤须确认动物是否已经死亡。操作人员应确保动物无生命指征（胸腔无起伏，且眼睑处泛白，无视觉反应等）。结合动物数量及操作人员心理素质，可采用开腔观察心跳或者将死亡动物装入废弃物袋子后等待30min，之后再次确认是否有存活的动物，若仍有未死亡动物需再次执行安乐死。

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