秋水仙碱的缓释制剂及其使用方法_5

　　/ml，压实堆密度 0. 67g/ml， 豪斯纳比（Hausner ratio) 1. 26。流变学：流动时间4sec ;倾斜角23. 8°。

　　[0154] 混合：在造粒过程后，将颗粒与填充剂（例如，乳糖一水合物）、阻滞剂（例如， Retalac)、以及其它赋形剂（例如，流动增强剂、助流剂和/或润滑剂）混合，以进行片剂压 制工艺。为此，将这些成分手动通过0.8mm筛并且在立方形搅拌器（Erweka)中与颗粒混合 10分钟。在一个实施方案中，使用的助流剂可以是滑石。在另一个实施方案中，使用的润滑 剂可以是硬脂酸。随后使用合适的混合机将颗粒掺混。

　　[0155] 片剂的压制：为了形成片剂，需要压片压力。机械力将限定该片剂的物理性质，尤 其是所得片剂的破碎强度。机械强度与片剂的初始溶胀和片芯的稀释速度相互作用。该作 用是本领域公知的，并且可以在该产品的生命周期期间被调节和控制。

　　[0156] 在装备有双凸面、6mm直径的圆形压片工具的Korsch(EK 0)压片机上进行压片。 平均片剂硬度为约100N+/-15N。片剂经测量质量为约100mg，脆碎度是不可测量的。使用 Erweka Multickeck测量破裂强度和硬度。使用Erweka Friabilator和Mettler分析天平 测量脆碎度。使用Mitutoyo卡尺测量尺寸。

　　[0157] 实施例3 :缓释秋水仙碱制剂的溶出曲线的测量

　　[0158] 在多个时间点测量秋水仙碱缓释制剂的溶出。在37°C下将组合物溶于500ml水 中，并连续搅拌6小时。在数个时间点采集样本，以研究在亲水性基质体系中药物物质的溶 出过程的动力学。使用HPLC分析法分析样品中的秋水仙碱含量。

　　[0159] 测试数个批次，以确定缓释制剂的最佳溶出曲线。可以通过羟丙甲纤维素的浓度 或通过使用不同粘度等级的羟丙甲纤维素（例如lOOOmPa或lOOOOmPa)来修饰释放。在以 下测试的批次中，使粘度等级保持恒定，但改变片剂中羟丙甲纤维素4000mPa的浓度。

　　[0160] 下表3概括了被测试的多个组合物。

　　[0164] 表4-6和图1-4提供了多个批次的溶出曲线。具体地说，批次1-3的溶出曲线概 括于表4和图1中。批次1的曲线显示出在约30分钟内约92%释放，随后为恒定释放。2 小时后发生完全溶出。批次2显示出在约30分钟内约83%释放，随后为恒定释放。2小时 后发生完全溶出。批次3显示出在约30分钟内约74%释放，随后为恒定释放。2小时后发 生完全溶出。

　　[0167] 批次4的溶出曲线概括于表5和图2。批次4A的显示出在约30分钟内约30%释 放，随后为恒定释放。6小时后发生完全溶出。批次4B显示出在约30分钟内约23%释放， 随后为恒定释放。6小时内发生完全溶出。在该实施例中，片剂硬度的差异导致了释放率的 差异。图3显示出批次1-4的溶出曲线。

　　[0169] 批次5的溶出曲线概括于表6和图4。批次6表示速释版的组合物。批次5的曲 线显示出在5分钟内90%释放。2小时内发生完全溶出。

　　[0171] 如先前所提到的，通过调节阻滞剂（即Retalac)的量和片剂硬度，可以将缓释组 合物的释放曲线改变为特定的或期望的目标释放。该释放取决于多种因素，包括秋水仙碱 的外层（即，速释部分）的溶蚀以及秋水仙碱的内层（即，缓释部分）的扩散。由于缓释制 剂中秋水仙碱的百分比低，并且所述片剂小，因此溶蚀和扩散之间的这种平衡非常灵敏，必 须精细地调整以达到非常特定的溶出曲线。

　　[0172] 实施例4:缓释秋水仙碱制剂在乙醇中的溶出曲线的测量

　　[0173] 为了评价所述组合物在醇中的剂量倾卸或溶出的潜在性，在多个时间点测量秋水 仙碱的缓释制剂在乙醇中的溶出。在37°C下，将所述组合物溶于500ml的3种溶液：5%、 20%和40%乙醇，并且连续搅拌6小时。在数个时间点采集样本，以研究在亲水性基质体系 中药物物质的溶出过程的动力学。使用HPLC分析法分析样本中的秋水仙碱含量。

　　[0174] 实施例5 :缓释秋水仙碱制剂的治疗效果

　　[0175] 在临床研究中评价含秋水仙碱的缓释制剂的治疗效果，该临床研究为多剂量、随 机化、交叉研究，其将评价向健康志愿者给予的约3种不同的0. 5mg的秋水仙碱缓释制剂 (例如测试产品1，2, 3)与0.5mg的速释制剂（对照产品）的生物利用度。该研究的主要目 的是评价测试药物和对照药物在血液以及嗜中性粒细胞或白细胞中的药代动力学（PK)。

　　[0176] 研究目标：该研究的主要目标是在健康的人志愿者中比较秋水仙碱的测试产品与 对照产品的药代动力学。具体来说，在使用对照产品和测试产品治疗时，评价在血液中（本 文称为血液PK)、嗜中性粒细胞或白细胞中（本文称为嗜中性粒细胞PK)的秋水仙碱水平。

　　[0177] 所测试的假设是：以缓释片剂的形式给予等量的秋水仙碱会导致较低的峰值水平 (Cmax)，同时保持相等的绝对生物利用度（曲线下面积AUC)。测量在嗜中性粒细胞中的秋 水仙碱浓度，这是因为通常认为，重组60% -70%的白细胞的嗜中性粒细胞通常在炎性反 应中起重要作用，并且被认为在使用秋水仙碱作为治疗的一些疾病中起主要作用。因此，为 了实验的目的，可以分析白细胞或嗜中性粒细胞。因此，如果使用，本文所使用的术语嗜中 性粒细胞还指代白细胞。由于已知秋水仙碱优先累积于嗜中性粒细胞中并且抑制许多它们 的促炎功能，所以它们被认为是秋水仙碱治疗的主要靶标。因此，特别关注于了解在分离的 嗜中性粒细胞或白细胞中是否能达到秋水仙碱的相似浓度，这提供了关于潜在的生物等效 性的信息。因此，在该研究的过程中，在多个时间点采血以检查在血液和嗜中性粒细胞中的 秋水仙碱浓度。

　　[0178] 总体研究设计：将该研究设计为随机化的交叉研究。有3组患者（η = 3X至少8 名患者）。组1将接受对照药物或测试药物约8-14天。冲洗期后，他们将接受测试药物1 约8-14天。组2将在相同的时间段内接受对照药物。冲洗期后，他们将在相同的时间段内 接受测试药物2。组3将在相同的时间段内接受对照药物。冲洗期后，他们将在相同的时间 段内接受测试药物3。在第一个24h在住院病人基础上治疗研究参与者，以及在剩余时间 时，在门诊病人基础上治疗研究参与者。在两个试验之间存在足够长的冲洗期。

　　[0179] 个体参与：有3组患者（η = 3X至少8名患者）。对于每种测试药物，在第一轮 健康志愿者将被随机分配到一种药物。在足够的冲洗期后，同样的个体将接受对照药物。

　　[0180] 研究持续时间：以单次剂量/天给予研究药物约8-14个连续日。该研究由24h血 液PK(高频数据采集）组成。在间隔中分析嗜中性粒细胞PK，该间隔关系到在整个实验期 间在后者中的秋水仙碱水平的结论性测定。

　　[0181] 治疗方案：以下是治疗方案的实例

　　[0182]

　　[0183] 研究技术和数据分析：分析化学技术（HPLC)或免疫技术（放射免疫检定法）可 以用于评价秋水仙碱和可选择地其代谢物。通过适当的数据管理和统计软件分析收集的数 据。

　　[0184] 个体人群：该研究人群由男性健康志愿者构组成。为了加入该研究中，所述受试者 必须是25-40岁；体重不少于60kg且不大于120kg ;健康；没有主要的竞争性并存疾病且没 有对秋水仙碱治疗的禁忌症；愿意提供同意书并被随机分配至该研究中。符合下述标准的 受试者将被排除在外：使用其它抗炎药物/免疫抑制药物进行治疗；使用已知与秋水仙碱 有药物相互作用的药物进行治疗；肾/肝损伤；已知对秋水仙碱具有超敏性。

　　[0185] 治疗模式：早晨一天一次给予所述药物。

　　[0186] 数据采集模式：对于血液PK，在该研究开始时在24h时段内以短间隔（足够的时 间点以建立药代动力学数据，例如：_1、+〇· 5h、lh、L 511、211、311、411、511、711、1011、1211、1511和 24h)(在下一次施用之前）采集血液。其它的时间点可以是在该研究的结束时在停药后24h 和72h以检查该药物的冲洗期。PK分析包括秋水仙碱的血浓度。应用适当的技术以分离血 液并定量化秋水仙碱。

　　[0187] 对于嗜中性粒细胞PK，在数个时间点从生血中分离或纯化嗜中性粒细胞。在该研 究开始时收集嗜中性粒细胞以及在该研究的结束时至少一次收集嗜中性粒细胞。PK分析包 括在分离的嗜中性粒细胞中的秋水仙碱浓度。

　　[0188] 实施例6 :速释制剂在患有心血管疾病的患者中的治疗效果

　　[0189] 为了评价速释制剂在心血管疾病患者中的治疗效果，进行前瞻性、随机化、观察 者盲的终点试验，以确定向包括阿司匹林和高剂量他汀类的标准二级预防性治疗中添加 〇. 5mg/天的秋水仙碱是否降低了患有客观上经诊断的且临床上稳定的冠心病的患者的心 血管事件的风险。该研究在PCT/AU2013/001261中描述，并由此通过引用将其整体并入。

　　[0190] 研究实施和设计：在 Heart Research Institute of Western Australia(西 澳大利亚心脏研究所）的赞助下实施LoDoCo试验。它由澳大利亚临床试验登记处 (12610000293066)登记的主要研究者设计，并在2008年7月收到了来自在Sir Charles Gairdner Hospital Perth Western Australia的人类研究伦理委员会的伦理批准。没有 外部资金来源。

　　[0191] 该研究具有前瞻性随机化的、开放性盲法终点设计。将提供常规临床评价的患有 已确定的冠心病的符合规定并知情同意的患者随机分配以接受0. 5mg/天的秋水仙碱或不 接受秋水仙碱，且对他们的医学治疗没有任何其它改变。所有结果由对治疗分配不知情的 有经验的评判员评价。

　　[0192] 研究规模和合格性：计划招募的研究人群包括250名患者被随机分配至对照组以 及250名患者被随机分配至治疗组，他们在随机化分配日期之后对秋水仙碱至少耐受4周。 如果患者符合下列各项标准则有资格加入：1)血管造影证实的冠心病；2)年龄为35岁至 85岁；3)临床稳定至少6个月；4)没有主要的竞争性并存疾病且没有对秋水仙碱治疗的禁 忌症；5)被认为是依从治疗的并参加常规的心血管病学跟进约访；以及6)愿意同意并随机 分配至该研究中。具有心脏搭桥手术史的患者只有当他们在超过10年以前进行了心脏搭 桥手术或具有移植失败的血管造影证据或由于他们的心脏搭桥手术而已经进行了支架术 才是合格的。所有患者在随机分配化之前签署了知情同意书。

　　[0193] 随机化：随机化顺序为计算机生成的，始终对研究者保密，并且由未参与研究患者 的评价或管理的研究助理来管理。一旦该助理收到同意书，该患者的人口学数据就被输入 到数据库，并书面通知研究者和患者，告知该患者被分配到治疗组。尽管选择使用最低剂量 的可获得的秋水仙碱，但可以预期：由于胃肠道副作用，许多患者会在随机化分配之后在早 期退出治疗。为了确保治疗方案中所需数量的患者实际上耐受治疗，如果由于副作用患者 在第一个月就停止使用秋水仙碱，则该方案允许研究助理将新招募的患者分配至治疗组。 不耐受治疗的患者仍保留在该研究中，并且以常规方式跟进，且主要为了治疗分析而将他 们包括在内。

　　[0194] 干预：由他们咨询的心脏病专家，向随机化分配至积极治疗的患者每天给予 0. 5mg秋水仙碱的处方。药物由他们平常的药剂师分发，并且如果需要，对患者报销这些处 方的花费。照常继续所有其它治疗。

　　[0195] 跟进和临床结果的定义：患者依从治疗，并在常规的跟进随访时和任何非计划的 入院时采集结果数据。急性冠脉综合征（ACS)被定义为（a)急性心肌梗塞（AMI)，由血清 肌钙蛋白超过正常值上限的升高有关的急性缺血性胸痛所证实，或（b)不稳定型心绞痛 (UA)，由与血清肌钙蛋白的升高无关，但与患者的冠状动脉解剖学发生变化的血管造影术 证据有关的患者的心绞痛的最近加速所证实。（不稳定型心绞痛Braunwald分类类型IB 和IIB)。如果有显著的支架内狭窄或急性支架血栓形成的证据，则ACS被表征为支架相关 的。院外心脏骤停被定义为在患者的死亡证明上所证实的猝死，或非致命性院外心脏骤停， 其被定义为从与备有证明文件的心搏停止、心室性心搏过速或心室纤维性颤动有关的暴脱 中的恢复。非心因性血栓性缺血性卒中被定义为由治疗神经病学家判定的CT或MRI证明 的缺血性卒中，因为其并不是由于心房颤动或颅内出血。

　　[0196] 主要疗效结果是复合的、ACS、致命或非致命性院外心脏骤停或非心因性血栓性缺 血性卒中。次要结果为（a)主要结果的单个组分，和（b)与支架疾病无关的ACS组分。

　　[0197] 时间线：预先设定的研究持续时间为在所有患者中为期两年的最小跟进。因此，该 研究在2012年5月31日结束。在5月期间，通过电话与所有存活的患者联系，以从跟进的 最后日期收集依从性和结果数据。在所有患者中获得最终结果数据，并且患者在跟进中没 有失去联系。

　　[0198] 统计功效：假设所有对照组具有8%的组合事件率（ACS、院外心脏骤停或非心因 性血栓性缺血性卒中），2年的应计间隔和2年的应计间隔之后的跟进，基于5%的双侧显著 性水平，计划的样本规模提供>80%的功效以检测〈0. 50的危险比率。

　　[0199] 数据分析：包括平均值和标准偏差在内的概括统计量通过治疗方案针对所有基线 特征来计算。通过从（1)事件日期或死亡日期；或（2)未经历所定义事件的那些患者的试 验结束日期中减去随机化分配的日期以计算以天计的事件结果的所有时间。如预先设定 的，主要疗效分析是基于意向治疗原则。该意向治疗分析包括所有随机化的个体和从随机 化到该试验结束的时间期间的所有事件。试验结束日期固定为2012年5月31日。基于耐 受并依从治疗超过随机化的第一个月的患者，还进行了次要预先设定的治疗分析。在该分 析中包括从随机化直至不依从秋水仙碱治疗方案的时间期间内的所有事件。

　　[0200] 使用Kaplan-Meier图呈现了所有结果的时间-对-第一事件 (time-to-first-event)。使用包括被编码为对照或秋水仙碱的治疗组的考克斯比例风险 模型分析主要疗效结果。类似地分析次要结果。此外，该主要分析通过性别、年龄、糖尿病 的诊断、过去的心肌梗塞、不稳定型心绞痛、冠状动脉搭桥手术、冠状动脉血管成形术、以及 使用阿司匹林、氯吡格雷或二者的治疗、高剂量他汀类治疗（定义为相当于40mg或更多的 阿托伐他汀的他汀类的剂量）、β阻滞剂、钙阻滞剂和ACE抑制剂进行分层。

　　[0201] 结果：在2008年8月至2010年5月期间，901名患有稳定型冠心病并参加了常规 的门诊病人心脏病学检查的患者被评价了对于该研究的合格性。其中，297名（33%)患者 不符合入围标准，72名（8% )患者拒绝参加，以及532名（59% )患者被登记进入该研究， 将其中的250名患者随机化分配为对照组以及282名为治疗组。在那些被随机化分配为治 疗组的患者中，由于胃肠道副作用，32名（11% )在早期报告不耐受，以及7名患者随后报 告他们选择不开始治疗。在最小为24个月至最大为44个月的研究阶段期间内，跟进随访 所有532名随机化的患者。中位跟进随访为36个月。

　　[0202] 结果：主要结果在55/532名患者中出现，包括分配至秋水仙碱治疗的 15/282(5.3% )名患者，和分配至对照组的40/250 (16% )名患者（风险比0.33,95% CI ; 0. 18-0. 59 ;ρ〈0. 001，需要治疗的数目为11)。针对主要结果实施灵敏度分析，针对使用钙 离子通道阻滞剂和β阻滞剂治疗进行调整。这些结果与主要分析一致。

　　[0203] 在早期，秋水仙碱对主要结果的作用是明显的，并且秋水仙碱的益处在整个跟进 随访期间持续产生。不存在基于任何临床变量或治疗变量而不同治疗效果的证据。

　　[0204] 主要结果的减少主要受呈现ACS的患者数量的减少所影响，（13/282(4.6% ) vs. 34/250(13. 4% )，风险比 0· 33 ;95% CI ;0· 18-0. 63 ;ρ〈0· 001)。院外心脏骤停和非心因 性血栓性缺血性卒中是不频发生的，但在治疗组中也减少。

　　[0205] 在呈现ACS的47名患者中，8名（17% )患者中事件为支架相关的（各组中2名 有急性支架血栓形成的证据，以及各组中2名有明显的支架内狭窄的证据）。进一步的分 析证实，被随机化分配为治疗的患者不太可能呈现与支架疾病无关的ACS (9/282 (3. 2 % ) vs. 30/250(12% )，风险比 0· 26,95% CI ;0· 12-0.55 ;ρ〈0· 001)，它与 AMI (4/282(1.4% ) vs. 14/250 (5. 6 % )，风险比 0· 25,95 % CI ;0· 08-0. 76 ;p = 0· 014)或 UA (5/282 (1. 8 % ) vs. 16/250(6. 4% )，风险比 0· 27,95% CI ;0· 10-0. 75 ;p = 0· 011)有关。

　　[0206] 在由于早期不耐受或不依从而没有接受治疗超过第一个月的39名随机化分 配为治疗的患者中，4名（10% )由于急性支架血栓形成（n = 1)和UA(η = 3)而呈现 ACS。均依从和耐受治疗超过随机化的第一个月的患者比对照患者具有明显更少的事件 (11/243(4. 5% )vs. 40/250(16% )，风险比 0· 29,95% CI ;0· 15-0. 56 ;ρ〈0· 001)。所有治疗 分析的结果与基于意向治疗分析的结果相一致。

　　[0207] 与秋水仙碱组中有4名患者死亡相比，对照组中有10名患者死亡。在10名对照 之中，5名死于推测的心脏原因；2名死于院外心脏骤停；2名为心肌梗塞后的心源性休克； 以及1名死于心脏搭桥手术。秋水仙碱组中的所有4名患者死于非心脏原因。

　　[0208] 该实验证明，向患有稳定型冠心病患者的标准治疗中添加秋水仙碱0. 5mg/天能 显著降低心血管事件的风险，包括降低ACS、院外心脏骤停和非心因性血栓性缺血性卒中的 风险。由对照组中低事件率所证实的，在广泛使用的有效二级预防策略（包括高剂量的他 汀类）的背景下，实现了秋水仙碱的益处。添加秋水仙碱的作用在早期变得明显，随时间持 续积累，并且主要由与支架疾病无关的ACS的减少所驱动。

　　[0209] 实施例7 :缓释秋水仙碱制剂的剂量调整

　　[0210] 为确定合适的剂量量，向具有不同体重的患者群给予所述缓释制剂。假设0. 5mg 的片剂在平均体重患者中产生了秋水仙碱的某血浆水平，并且在每个患者中应该达到该特 定水平以实现功效，技术人员可以对不同体重组中的〇.5mg片剂进行PK分析。可以预期的 是，在重体重患者中的血液水平（Cmax和AUC)较低，这表明向更高剂量的剂量调整是必要 的。

　　[0211] 研究目标：该研究的主要目标是比较0. 5mg秋水仙碱片剂在至少2个不同体重组 的健康人类志愿者中的药代动力学。具体地说，在治疗时评价秋水仙碱的血液水平。所测 试的假设是，给予等量的秋水仙碱导致取决于体重的不同秋水