人结直肠腺癌细胞(Caco

　　Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌，人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后，自发分化为肠上皮样细胞，是常用的肠癌细胞模型。

　　Caco-2细胞分离自直肠原位癌；当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。

　　细胞名称：人结直肠腺癌细胞

　　细胞简称：Caco-2

　　细胞别名：CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC

　　产品货号：TCH-C146

　　组织来源：结直肠

　　细胞形态：上皮样

　　生长特性：贴壁生长

　　培养体系：EMEM+20%FBS+1%P/S或DMEM-H+20%FBS+1%P/S

　　

　　Caco-2细胞培养注意要点

　　人结直肠腺癌细胞（CaCo-2）一般呈岛状生长，Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡，这是CaCo-2细胞本身的特性，属于正常现象。

　　

　　【CaCo-2细胞中的空泡】

　　Caco-2传代周期较长，倍增时间约为72h。这是因为Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:4传代的情况下，约一周传代一次。

　　Caco-2细胞较难消化，细胞间连接紧密，使得细胞难以解离。通常加入胰酶后，细胞克隆的四周先飘起来，中间仍贴壁；随后整片克隆脱落，但细胞与细胞间不会分散。消化时间为5-10分钟，该细胞难以被吹散为单个细胞，当细胞能够被吹散为小的细胞团块，即可终止消化。

　　Caco-2贴壁缓慢，在标准培养条件【EMEM＋20% FBS＋1% P/S】下，接种后需要48小时以上完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。期间不要频繁观察或晃动培养皿。

　　Caco-2有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上，是正常的，随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞，可以减少漂浮细胞产生。如果细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常。细胞密度越高，消化时间越长。

　　血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。

　　Caco-2细胞常见问题

　　细胞不贴壁怎么办？

　　Caco-2细胞培养基里添加的胎牛血清比例为20%，当血清比例降低，贴壁性下降时，补充胎牛血清至20%，继续培养1-2天，细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱（呈紫红色），偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁。

　　能否用DMEM替代MEM？

　　可以。DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是在MEM培养基的基础上研制的。Caco-2细胞在DMEM+20%FBS+1%P/S条件下生长状态正常。

　　MEM中不含NEAA会怎样？

　　当使用不含NEAA的MEM培养基时，Caco-2生长速度可能下降，漂浮细胞增多。

　　

　　细胞消化不下来怎么办？

　　如果消化5-10分钟，细胞部分脱落，另一部分仍然贴壁紧密，可以将脱落细胞转移至离心管，向原瓶中加入新的胰酶，放入培养箱继续消化剩余细胞，每隔1min拿出来观察，直到细胞滑落。

　　漂浮细胞多怎么办？

　　有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上，是正常的，随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞，可以减少漂浮细胞产生。

　　如果Caco-2细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。

　　

　　作者：海星生物

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